Metodi avanzati per la produzione di proteine ricombinanti
#wemakeproteins
Descrizione
La crescente complessità dei bersagli biologici da sottoporre a caratterizzazione strutturale richiede costantemente approcci altamente versatili per l’espressione e la purificazione ricombinante. Quando ci si concentra sui complessi macromolecolari, le difficoltà legate alla fase iniziale di screening ricombinante sono ulteriormente amplificate dalla necessità di identificare costrutti adatti per co-esprimere o ricostituire in vitro le interazioni molecolari essenziali per la stabilizzazione del complesso. Le grandi piattaforme industriali ad alta produttività offrono metodi estremamente efficienti e automatizzati per ottenere librerie di costrutti proteici per la valutazione dell’espressione e della purificazione, mentre diversi laboratori di ricerca accademica si basano ancora su approcci più conservativi del tipo “un costrutto, un ospite ricombinante, un bersaglio”. Spesso, la scelta dipende dagli investimenti nell’automazione, poiché i costi associati alla creazione di strutture ad alta produttività non sono accessibili a tutti i gruppi di ricerca. Con l’obiettivo di minimizzare i tempi e i costi associati allo screening iniziale per l’espressione ricombinante, abbiamo ottimizzato le strategie di clonazione ed espressione per aumentare la produttività senza la necessità di automazione, e le abbiamo abbinate a una struttura avanzata che include ospiti per l’espressione di cellule batteriche, di lievito, di insetto e di mammifero.
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Cellule HEK293 coltivate in sospensione nel nostro laboratorio di colture cellulari umane, che è parte della facility per produzione di proteine ricombinanti. |
Pubblicazioni e disseminazione
Pubblicazioni
- Faravelli S*, Campioni M, Palamini M, Canciani A, Chiapparino A, Forneris F.* Optimized Recombinant Production of Secreted Proteins Using Human Embryonic Kidney (HEK293) Cells Grown in Suspension. Bio-Protocol, 11, e3998. (2021) *Shared Corresponding Authors – PubMed – UNIFIND
- Forneris F, Canciani A, Ciossani G, Palamini M, Chiapparino A, Gabrieli P, Guarino SR, Campioni M, Nenci S, Magnani F. Versatile medium-throughput strategies for recombinant expression screening in structural biology. Acta Crystallographica A, A73, C1276. (2017) – (IUCR 2017 conference abstract)